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流式细胞术免疫分型策略

2021-09-29

    通过特异性抗体与细胞功能性膜蛋白的结合,可以对异质性细胞群进行识别并检测增殖、激活状态等。通常情况下,不止一种类型细胞会表达某种标志物,因此,在进行细胞免疫分型时,需要采用两种及以上的抗体,不同的抗体需要与不同的荧光染料偶联。伴随着抗体数量的增加,荧光染料的光谱更易于出现重叠。操作过程中,可以采用偶联染料的一抗,也可以先使用 一抗孵育,再使用偶联染料的尔康孵育。    通常需要设置对照组用于区分活性细胞、避免自发荧光和光谱重叠等影响。①细胞活性:死细胞的自发荧光以及非特异性的抗体结合容易造成假阳性,可以通过染色标记区分死细胞与活细胞,例如PI、DAPI等。②自发荧光:某些细胞天然存在的组分可发射荧光,为了检查自发荧光,可以设置未染色的细胞组。当自然荧光干扰过强市,可以使用不同的染料或者通过补偿处理。③光谱重叠:当使用多种荧光染料时,其发射光谱会发生重叠,导致不同通道中检测到同种染料的反射光,需要通过补偿处理。    当采用流式细胞术进行免疫分选时,需要提前收集整理相关文献,设计合理的靶蛋白组合以及染料组合,这样可以减少后期问题的出现。所有的流式细胞分析都需要用到单细胞悬液,当需要进行物理分离或者酶解消化时,需要主要去除细胞团块、细胞碎片和死细胞,减少假阳性的出现。

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骨再生材料的静电纺丝设计策略

2021-09-17

    静电纺丝技术通过特定配置的喷丝头和收集器,结合参数调整,可以制备出空心、芯壳、串珠结构等不同形态以及不同直径和独特结构的纳米纤维。由于骨的特殊分层和结构,静电纺丝纤维膜通过仿生粗糙度、动态压缩应力和层数模拟骨的自然生长状态,从而影响成骨细胞的增殖和分化。通过乳液静电纺丝、同轴静电纺丝和对预制纳米纤维的可控热处理等大量技术,可以制备出中空或者芯壳结构的纳米纤维。    乳液静电纺丝技术采用不互溶或者部分互溶的双组份共混体系,利用传统装置,可在纺丝过程中实现双组份间分离,也可以在少量表面活性剂存在的情况下,制备油包水(W/O)或者水包油(O/W)乳液进行乳液静电纺丝,两种方法都可获得芯壳结构超细纤维。乳液静电纺丝技术不要求药物和载体使用共同溶剂,乳液滴的形成还可保护药物的活性,减少其与有机溶剂的接触,因此该法适用于水溶性药物的包载及释放。例如,研究者将有机溶剂二氯甲烷、表面活性剂Span-80与载血管内皮生长因子(VEGF)的透明质酸溶胶混合,高速搅拌后获得负载均匀为微溶胶颗粒的W/O乳液,最后加入左旋聚乳酸(PLLA)和N, N-二甲基甲酰胺(DMF)获得静电纺丝溶液。同轴静电纺丝技术可以将两种材料的溶液同时通过同轴喷丝,形成的芯壳结构纤维会有清晰的界面。壳层的包裹可以避免芯层药物的初期突释,延长给药周期。芯层和壳层也可以分别负载不同的药物,实现药物的次序释放。    纳米纤维毡具有很高的总有效面积和表面粗糙度,结合其它的材料制备技术,可以设计出不同种类,适用于骨科各层次的修复材料。例如,研究者通过将负载VEGF的PLLA静电纤维丝与中和后的胶原纤维混合后于37℃自组装,获得的人造骨膜具有多层次的微纳米结构,更好地模拟了细胞外机智微环境。除此之外,还有研究报道,将介孔结构电纺丝热响应聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPAm)膜作为模型,利用3D打印机在PNIPAm膜上打印不同的刚性PNIPAm /粘土图案,指导形成控制基材形状转变的内部应力。    近年来,具有智能特性的静电纺丝逐渐被用于骨再生。当环境中环境中出现温度、感染等刺激时,刺激响应型电纺材料会做出变化,实现可控按需的药物释放、引导细胞反应等。参考资料:[1] Wu L ,  Gu Y ,  Liu L , et al. Hierarchical micro/nanofibrous membranes of sustained releasing VEGF for periosteal regeneration[J]. Biomaterials, 2019, 227:119555.[2] Yang J ,  Han Y ,  Lin J , et al. Ball-Bearing-Inspired Polyampholyte-Modified Microspheres as Bio-Lubricants Attenuate Osteoarthritis[J]. Small, 2020:e2004519.[3] Chen T ,  Bakhshi H ,  Liu L , et al. Combining 3D Printing with Electrospinning for Rapid Response and Enhanced Designability of Hydrogel Actuators[J]. Advanced Functional Materials, 2018, 28(19):1800514.

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